毛细管等电聚焦技术(cIEF)是一种特殊的分离技术,是表征蛋白质电荷不均一性的强有力工具。其原理是在毛细管两端加上直流电压,管内的载体两性电解质则可以形成一定范围的pH梯度(3-10),蛋白质依据其多带电荷向阳极或阴极发生移动,直到其静电荷为0的某个pH值(即其pI点)时停止移动,最终蛋白可以被聚焦成很窄的区段,从而达到分离目的。在与高分辨质谱技术联用之后,质谱可以对分离的蛋白进行高分辨表征,揭示其结构特点。在单抗,融合蛋白,糖基化蛋白,抗体偶联药物甚至病毒蛋白领域拥有巨大的应用潜力。
1. cIEF-MS根据等电点差异成功分离鉴定出Infliximab的4种变体结构;2. 主峰去卷积之后,揭示的糖基修饰变体